? ? ? ? 什么是固定相？簡(jiǎn)而言之就是在色譜分離中固定不動(dòng)、對(duì)樣品產(chǎn)生保留的一相。固定相的選擇對(duì)樣品的分離起著重要作用，有時(shí)甚至是決定性的作用。不同類型的色譜采用不同的固定相，如氣-固色譜的固定相為各種具有吸附活性的固體吸附劑；氣-液色譜的固定相是載體表面涂漬的固定液，液相色譜中的固定相為各種鍵合型的硅膠小球，離子交換色譜中的固定相為各種離子交換劑，排阻色譜中的固定相為各種不同類型的凝膠等等。以下，恒譜生將簡(jiǎn)單帶大家了解一下固定相的不同類型以及它們有什么特點(diǎn)。
? ? ? ? 正相色譜
? ? ? ? 正相色譜柱填料極性強(qiáng)，洗脫順序由弱到強(qiáng)。
? ? ? ? 正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其他具有極性官能團(tuán)胺基團(tuán)，如（NH2，APS）和氰基團(tuán)（CN，CPS）的鍵合相填料。
? ? ? ? 由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。恒譜生有多款正相色譜柱，比如Diol、SiL色譜柱等，可以用于分析堿性有機(jī)化合物，如維生素、類固醇以及其它許多藥物分子等。
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? ? ? ? 反向色譜
? ? ? ? 反相色譜柱填料極性弱，洗脫順序由強(qiáng)到弱。
? ? ? ? 反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱官能團(tuán)的鍵合相。反向色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分最先被沖洗出，而極性弱的組分會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
? ? ? ? 色譜柱是HPLC分離過(guò)程中的核心，而反相色譜柱其分析能力強(qiáng)，常作為分析柱的首選。恒譜生 C18 色譜柱在選擇性，梯度和等度條件上都有出色峰形；更高的分離度、靈敏度和重現(xiàn)性；更寬的 pH 耐受性，適合分析各種類型的化合物。除此之外，恒譜生還有多種不同類型的液相色譜柱可供選擇，比如C4、C8，ODS等色譜柱。
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? ? ? ? 離子交換色譜
? ? ? ? 離子交換色譜法的固定相為離子交換劑，常用的有離子交換樹(shù)脂和化學(xué)鍵合離子交換劑。經(jīng)典離子交換色譜法的固定相為離子交換樹(shù)脂，其缺點(diǎn)是易于膨脹，傳質(zhì)較慢，柱效低。不耐高壓。
? ? ? ? 親和色譜
? ? ? ? 親和色譜也稱為親和層析，是一種利用固定相的結(jié)合特性來(lái)分離分子的色譜方法。將一對(duì)能可逆結(jié)合和解離生物分子的一方作為配基（也稱為配體），與具有大孔徑、親水性的固相載體相偶聯(lián)、制成專一的親和吸附劑，再用此親和吸附劑填充色譜柱，當(dāng)含有被分離物質(zhì)的混合物隨著流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱時(shí)，親和吸附劑上的配基就有選擇地吸附能與其結(jié)合的物質(zhì)，而其他的蛋白質(zhì)及雜質(zhì)不被吸附，從色譜柱中流出，使用適當(dāng)?shù)木彌_液使被分離物質(zhì)與配基解吸附，即可獲得純化的目的產(chǎn)物。它可以用來(lái)從細(xì)胞提取物中分離純化核酸、蛋白，還可以從血漿中分離抗體。
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? ? ? ? ?總之，不論是何種類型的固定相對(duì)于手性異構(gòu)體的拆分以及蛋白質(zhì)和多肽大分子的分離仍在不斷的探索完善之中，生物科學(xué)在進(jìn)步，相信未來(lái)有關(guān)色譜固定相的研究會(huì)越來(lái)越完善與開(kāi)拓新的方向。恒譜生作為色譜耗材的高科技制造商，也將助推色譜行業(yè)發(fā)展，為廣大的色譜工作者提供高品質(zhì)的色譜耗材產(chǎn)品。
發(fā)布于: 2021-05-07