?????? 經(jīng)常做蛋白質(zhì)純化分離實(shí)驗(yàn)的色譜工作者，對(duì)于疏水色譜（Hydrophobic interaction chromatography，簡(jiǎn)寫(xiě)HIC）肯定不陌生，血清蛋白、膜結(jié)合蛋白、核蛋白、受體、重組蛋白等化合物純化都需要用HIC色譜法。HIC在是利用樣品分子與固定相的疏水力作用的不同，用流動(dòng)相洗脫時(shí)，各組分遷移速度不同而達(dá)到分離的目的。疏水相互作用色譜法具有對(duì)蛋白質(zhì)的回收率高，蛋白質(zhì)不失活，蛋白質(zhì)變性可能性小等優(yōu)點(diǎn)。
?????? 疏水作用色譜固定相的非極性比較弱，流動(dòng)相多采用高濃度鹽緩沖液進(jìn)行梯度洗脫。溫和的分離條件，可以避免反相色譜中由于固定相較強(qiáng)的疏水性和有機(jī)流動(dòng)相引起蛋白質(zhì)的不可逆吸附和變性，因此特別適用于活性物質(zhì)的分離與純化。
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??????? 在進(jìn)行分析時(shí)，需要注意幾點(diǎn)：溶液的pH值，pH值的不同對(duì)蛋白質(zhì)純化的效果也會(huì)不同。如果你想要蛋白質(zhì)洗脫順利，pH值可以遠(yuǎn)離其等電點(diǎn)，疏水性減少，蛋白質(zhì)與固定相配基結(jié)合不易，有利于蛋白質(zhì)洗脫。想要提高層析柱的分離度，可以從提高柱溫入手。柱溫升高可以使疏水作用增加，吸附能力增加，從而提高分離度。
??????? 層析柱分離效果好不好，不僅是這些因素影響，平常的保養(yǎng)以及使用方法也需要注意。使用一段時(shí)間后，可以將柱子沖洗一下，將雜質(zhì)洗掉，避免雜質(zhì)影響分析結(jié)果，比如雜峰的出現(xiàn)。可以在柱前添加一個(gè)色譜保護(hù)柱，它可以截留樣品中一些強(qiáng)殘留、強(qiáng)酸性和強(qiáng)堿性物質(zhì)，防止它們污染和破壞色譜柱中的填料。恒譜生多款色譜保護(hù)柱及柱芯適用于不同的色譜柱，匹配到您的各種需求。恒譜生自主研發(fā)的2.1超高壓分析保護(hù)柱，特別適合用于超高效液相色譜，死體積少，無(wú)背壓，精心設(shè)計(jì)，省去中間鏈接的管路和螺絲接頭，更利于操作。
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??????? 疏水相互作用色譜有很多優(yōu)點(diǎn)，當(dāng)然也有缺點(diǎn)，比如有的蛋白質(zhì)在高鹽中溶解度降低，所以它的應(yīng)用能力范圍會(huì)受到一定限制，比較適合疏水性蛋白質(zhì)純化分離。想了解更多色譜資訊，可關(guān)注恒譜生！每周定期分享，共同進(jìn)步！
發(fā)布于: 2021-08-20